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水果中草甘膦及其代謝物的測定SPE-UPLC-MS/MS法解決方案
草甘膦是一種非選擇性、無殘留滅生性除草劑，對多年生根雜草非常有效，廣泛用于橡膠、桑、茶、果園及甘蔗地。草甘膦的使用量逐年增加，給農作物、人類健康以及生態(tài)環(huán)境帶來了一定的安全隱患。目前常用草甘膦及其代謝物的檢測方法通常存在操作時間長、需要衍生等問題。
迪馬科技在參考各種標準及文獻的基礎上，建立了水果中草甘膦及其代謝物氨甲基膦酸的測定SPE-UPLC-MS/MS法：采用水提取，ProElut GLY固相萃取專用柱凈化樣品，收集流出液，Dikma Polyamino HILIC色譜柱分離檢測，該方法特點：
1) 前處理步驟少，提取液直接通過凈化柱接收流出液即可；
2) 有機溶劑消耗量小，前處理過程中也無需使用酸堿試劑；
3) 儀器分析簡單，樣品無需衍生直接分析，可提高結果穩(wěn)定性及減少實驗成本；
4) 方法定量限0.05 mg/kg。
以下為詳細解決方案，敬請參考！
水果中草甘膦及其代謝物的測定SPE-UPLC-MS/MS法
1、適用范圍
本方法適用于蘋果和橘子中氨甲基膦酸和草甘膦的檢測，定量限0.05 mg/kg。
2、標準品配制
單標標準儲備液：準確稱取各標準品，用水配制成1000 μg/mL的單標標準儲備液。
混標標準中間液：分別吸取各單標標準儲備液，用水配制成1.0 μg/mL和10 μg/mL的混標標準中間液。
3、提取
取2 g樣品于50 mL離心管中，加入8 mL水、10 mL二氯甲烷，振蕩10 min，超聲10 min，8000 rpm離心5 min，取全部上清液于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻，取5 mL，待凈化。
4、凈化——ProElut GLY 6 mL (Cat.#: 65938）
| (1)活 化： | 依次加入5 mL甲醇、5 mL水，棄去流出液； |
| (2)上 樣： | 將待凈化液加入柱中，棄去前3 mL流出液，收集后2 mL流出液，混勻，濾液過0.22 μm尼龍濾膜，上機分析。 |
注：同方法制備基質匹配標準溶液。
5、UPLC-MS/MS條件
5.1 UPLC 條件
色譜柱：Dikma Polyamino HILIC, 150 × 2.0 mm, 5 μm (Cat.#：99302)
流 速：0.2 mL/min 進樣量：10 μL 柱 溫：35 ℃
流動相： A：乙腈 B：5 mM乙酸銨溶液，氨水調節(jié)至pH=11
梯度設置：
| Time（min） | 0 | 2 | 2.1 | 8 | 8.1 | 15 |
| A（%） | 80 | 80 | 20 | 20 | 80 | 80 |
| B（%） | 20 | 20 | 80 | 80 | 20 | 20 |
5.2 質譜條件
| 電離模式：ESI | 掃描方式：負離子掃描 |
| 檢測方式：多反應監(jiān)測 | 電噴霧電壓：-4500 V |
| 霧化氣壓力：60 psi | 輔助氣壓力：60 psi |
| 氣簾氣壓力：35 psi | 離子源溫度：550 ℃ |
定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表
| 目標化合物 | 定性離子對 （m/z） (母離子/子離子) | 定量離子對 （m/z） (母離子/子離子) | 碰撞氣能量/eV | 去簇電壓/V |
| 草甘膦 | 167.8/62.8 | 167.8/62.8 | -30 | -50 |
| 167.8/81.0 | -21 | -31 | ||
| 氨甲基膦酸 | 109.9/62.8 | 109.9/62.8 | -23 | -53 |
| 109.9/78.9 | -35 | -51 |
6、添加回收結果
水果中氨甲基膦酸和草甘膦的LC-MS/MS檢測添加回收結果：
| 樣品基質 | 回收率（%） | |||
| 添加水平：0.05 mg/kg | 添加水平：0.5 mg/kg | |||
| 加標量：1.0 μg/mL，加100 μL | 加標量：10 μg/mL，加100 μL | |||
| 草甘膦 | 氨甲基膦酸 | 草甘膦 | 氨甲基膦酸 | |
| 蘋果 | 86 | 85 | 82 | 88 |
| 橘子 | 143 | 93 | 87 | 106 |
氨甲基膦酸10 ng/mL標準品XIC圖 氨甲基膦酸50 ng/mL標準品XIC圖
氨甲基膦酸100 ng/mL標準品XIC圖 氨甲基膦酸250 ng/mL標準品XIC圖
氨甲基膦酸500 ng/mL標準品XIC圖
氨甲基膦酸的標準曲線圖
R^2 = 0.9990
標準曲線濃度分別為：10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL
草甘膦10 ng/mL標準品XIC圖 草甘膦50 ng/mL標準品XIC圖
草甘膦100 ng/mL標準品XIC圖 草甘膦250 ng/mL標準品XIC圖
草甘膦500 ng/mL標準品XIC圖
草甘膦的標準曲線圖
R^2 = 0.9990
標準曲線濃度分別為：10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL
水果中草甘膦及其代謝物的測定SPE-UPLC-MS/MS法相關產品信息：
| 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
| 樣品前處理 | ||
| 65938 | 草甘膦檢測專用固相萃取柱 ProElut GLY | 6 mL, 30/pk |
| 244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取裝置 | 12位 |
| 4803 | 1,3,6 mL柱管通用連接器 | 15/pk |
| 4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
| 99011 | 真空/正壓兩用泵，無油 | 1/pk |
| 99013 | 抽濾瓶套裝 (包括硅橡膠管2米,2 L抽濾瓶及橡膠塞) | 1/pk |
| 30039 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm, 0.22 μm 100/pk |
| 標準品 | ||
| 12-MET-12133A-100MG | 氨甲基膦酸 [1066-51-9] | 100 mg |
| 46010 | 草甘膦 [1071-83-6] | 100 mg |
| 色譜柱及保護柱 | ||
| 99302 | Dikma Polyamino HILIC | 150 x 2.0 mm, 5 μm |
| HPLC溶劑Ÿ緩沖鹽Ÿ離子對試劑 | ||
| 50101 | 乙腈 HPLC級 | 4 L |
| 50102 | 甲醇 HPLC級 | 4 L |
| 50117 | 二氯甲烷 HPLC級 | 4 L |
| 50138 | 乙酸銨 HPLC級 | 100 g |
| 通用色譜產品 | ||
| 52401B | 瓶架/藍色（現(xiàn)貨） | 50孔 |
| 52401A | 瓶架/白色（現(xiàn)貨） | 50孔 |
| 1034 | 樣品瓶（棕色/螺紋） | 2 mL, 100/pk |
| 1035 | 樣品瓶蓋/含墊（已經組裝） | 100/pk |
| H80465 | HPLC 進樣針 | 25 μL |
紅色產品貨號#30039、#1034、#1035*
下載方案